醫(yī)療器械細(xì)菌回復(fù)突變試驗是檢測受試物對于微生物（細(xì)菌）的基因突變作用，預(yù)測其潛在的遺傳毒性，能夠快速篩查出導(dǎo)致DNA堿基對替代、增加或缺失的遺傳毒性物質(zhì)，通常優(yōu)先進(jìn)行細(xì)菌回復(fù)突變試驗來評價樣品的潛在的致突變性/遺傳毒性。
醫(yī)療器械細(xì)菌回復(fù)突變試驗利用鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株來檢測點突變。這類菌株本身不能合成組氨酸，故在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上，僅有少數(shù)自發(fā)回復(fù)突變的細(xì)菌生長。假如有致突變物存在，則營養(yǎng)缺陷型菌株會回復(fù)突變成野生型，故在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上能生長形成菌落。故可以根據(jù)菌落形成的數(shù)量判斷受試樣品中是否存在致突變物。某些致突變物需要代謝活化后才能引起回復(fù)突變，故需要同時在存在和沒有代謝活化協(xié)同的條件下進(jìn)行試驗。
中科檢測動物毒理試驗中心，提供毒理檢測，可以開展醫(yī)療器械細(xì)菌回復(fù)突變試驗，報告具有CMA和CNAS資質(zhì)，歡迎咨詢。

鼠傷寒沙門氏菌TA1535、鼠傷寒沙門氏菌TA97a或TA97或TA1537、鼠傷寒沙門氏菌TA98、鼠傷寒沙門氏菌TA100、鼠傷寒沙門氏菌TA102或大腸桿菌WP2uvrA或大腸桿菌WP2uvrA(PKM101)。

a、預(yù)實驗：對未知或懷疑對試驗菌株有抑制作用的試驗樣品，應(yīng)進(jìn)行預(yù)實驗。在有或無代謝活化的情況下，用回復(fù)突變的菌落數(shù)來評估樣品是否有細(xì)胞毒性，如有抑制作用，則需對試驗樣品浸提液進(jìn)行梯度稀釋，所選的劑量范圍應(yīng)包括細(xì)胞毒性從最大到小或無細(xì)胞毒性，一般至少包括5個試驗濃度梯度，并以最小或者無細(xì)胞毒性的濃度按照平板滲入法進(jìn)行主試驗。
b、主試驗（平板滲入法）：使用移液器將冷凍保存的菌株培養(yǎng)物接種于5mL營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基無菌試管內(nèi)，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10-12h至對數(shù)增長期，其濃度不少于1×109CFU/ml，培養(yǎng)瓶可用黑紙包裹，以防光線照射細(xì)菌。
c、融化頂層培養(yǎng)基，將融化好的頂層培養(yǎng)基分裝于無菌小試管，每管2mL，將試管放入45℃恒溫水浴鍋中保溫。

在保溫的頂層培養(yǎng)基中依次加入每種菌株的新鮮菌液0.1mL混勻，試驗樣品組加入浸提液0.1mL，陰性對照組加入0.1mL浸提介質(zhì)，陽性對照組加入0.1mL誘變劑，活化組加入0.5mL10% S9混合液，未活化組加入0.5mL 0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液，每個組做3個平行，輕輕混勻后迅速將此混合物倒入已經(jīng)固化的底層培養(yǎng)基平皿中，轉(zhuǎn)動平皿，使頂層培養(yǎng)基均勻分布，平放固化。全部平皿倒置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48~72h。

培養(yǎng)結(jié)束后計數(shù)并記錄每個平皿的菌落數(shù)，并計算3個平皿的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差。

YY/T 0870.1-2013 醫(yī)療器械遺傳毒性試驗 第1部分：細(xì)菌回復(fù)突變試驗